هدف: هدف این تحقیق تولید لنتی ویروس های حامل ژن Nurr 1 و بیان در سلول های انسانی می باشد.مواد و روش ها: قطعه ژنی IRES-EGFP با آنزیم های Bgl ll/Not 1 از ناقل pIRES 2 -EGFP جدا و با Klenow کور (Blunt) گردید. ناقل لنتی ویروسی pNL-EGFP/CMV/WPREdU 3 با آنزیم های Nhe 1 / Xho 1 برش و دو سر آن کور شد. قطعه ژنی ایزوله شده به این ناقل منتقل شد تا سازه لنتی ویروسی (I) به وجود آید. سپس ژن Nurr 1 با آنزیم های Xho 1 و BamH 1 از ناقل PCMX-NOT بریده و درون پلاسمید (I) خطی شده با Sal 1 و BamH 1 منتقل شد تا سازه نهایی لنتی ویروسی (II) تولید گردد. برای تولید لنتی ویروس های نوترکیب، رده سلول انسانی HEK- 293 T را با این پلاسمید نهایی، به همراه پلاسمیدهای غشایی و بسته بندی لنتی ویروس ترانسفکت شد. محیط این سلول ها که مملو از ذرات ویروسی شده بود جمع آوری و از ستون آمیکون عبور داده شد تا ذخیره غلیظ ویروس به دست آید. این ذخیره برای آلوده سازی سلول های هدف استفاده شد. بیان EGFP در زیر میکروسکوپ به اثبات رسید و بیان ژن Nurr 1 با RT-PCR سنجیده شد.نتایج: درستی مراحل کلونینگ با آنزیم های مربوطه اثبات شد. با میکروسکوپ فلورسنس بیان (Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP در هر دو مرحله ترانسفکشن و ترانسدوکشن ثابت گردید. تکنیک RT-PCR بیان Nurr 1 را در هردو مرحله به اثبات رسانید.نتیجه گیری: لنتی ویروس های ناقل ژن انسانی Nurr 1 تولید شده و به دنبال آلوده سازی سلول های انسانی HEK- 293 T با ویروس های مزبور، سلولهای فوق ژن Nurr 1 را به طور موفقیت آمیز بیان کردند.

آغاز گلدهی فاکتور مهمی است که عملکرد گیاه را تحت تأثیر قرار می دهد. عوامل محیطی تأثیر معنی داری بر مرحله گلدهی می گذارند. آنالیز بیوانفورماتیک فاکتور رونویسی MADS-box که به عنوان اجزای مهم در تشکیل گلدهی انجام گرفت. برکپودیوم گیاه مدل جدیدی است که برای درک بهتر مکانیسم های ژنتیکی، سلولی و بیولوژی مولکولی گیاهان مورد استفاده قرار می گیرد. در این مطالعه 43 توالی ژن های MADS-box برکپودیوم با استفاده از روابط فیلوژنی، موتیف های محافظت شده، نقشه کروموزومی، آنالیز جایگاه اتصال فاکتور رونویسی و ترکیبات آمینواسیدهای آنالیز شدند. هدف از این مطالعه شناخت بهتر مکانیسم های مولکولی مرتبط با گلدهی می باشد. در این مطالعه، نتایج نشان داد که ژن هایMADS-box بر روی تمامی کروموزوم های برکپودیوم پراکنده هستند، درحالی که کلاسترهای ژنی بر روی تمامی کروموزم ها به جز کروموزم شماره پنج قرار داشتند. آنالیز ترکیبات آمینواسیدی نشان داد که لوسین، سرین و گلوتامات بالاترین مقدار و پایین ترین میزان مربوط به تریپتوفان بود که باعث القای گلدهی می شود. براساس آنالیز فیلوژنی ژن ها به 4 گروه تقسیم بندی شدند. تست تاجیما وجود انتخاب متعادل را در توالی MADS-box پیش بینی می کند و درنتیجه، پلی مورفیسم در توالی ها حفظ می شود. در نتیجه می توان گفت که تنوع کل در ژن های MADS-box بالا بوده است. در مجموع، نتایج ما اطلاعات مفیدی برای بررسی ژن های درگیر در پاسخ به گلدهی فراهم نموده و شناخت مکانیسم مولکولی و روابط بین ژنی در مسیر گلدهی را تسهیل ساخته است.

فاکتورهای رونویسی MYB نقش های ساختاری و عملکردی متنوعی را در طیف وسیعی از گیاهان بر عهده دارند. برای مثال، مسیر سنتز آنتوسیانین که یک متابولیت ثانویه بوده و مسئول رنگدهی در بافت های مختلف می باشد توسط فاکتورهای مذکور کنترل می شوند. در این مطالعه، با استفاده از ژنهای همولوگ در گونه های نزدیک به توت (Morus Alba)، قطعه ای از یک ژن جدید متعلق به خانواده فاکتورهای رونویسی MYB از این گیاه جداسازی شد. ابتدا توالی پروتئینی 14 ژن مختلف تنظیم کننده آنتوسیانین از گونه های (ترجیحا) نزدیک به خانواده توت (Moraceae) انتخاب و هم ردیف شدند و سپس ناحیه دارای بیشترین مشابهت انتخاب شد. در مرحله بعد توالی cDNA این ژنها مورد همردیفی قرار گرفت و منطقه ای که بیشترین تشابه را داشت انتخاب گردید. با توجه به پلی مورفیسم موجود در این ناحیه آغازگرهای دجنریت طراحی گردید و این ناحیه از ژن از میوه توت جداسازی شد. محصول تکثیر شده در پلاسمید کلون و تعیین توالی شد که نتایج تعیین توالی نشان داد طول ناحیه جداسازی شده از ژن 140 جفت باز است و در دمین متصل شونده به DNA (دمین Myb) و اختصاصا« در موتیف های R1 و R2 فاکتور رونویسی قرار دارد. ارزیابی توالی تعیین شده توسط نرم افزارBLAST نشان داد این توالی با داده های موجود در بانک ژن همپوشانی و تشابه قابل توجهی دارد. تمامی ژنهای مشابه از خانواده فاکتور رونویسی MYB بودند که اغلب آنها در کنترل سنتز آنتوسیانین نقش دارند. بنابراین به نظر می-رسد ژن مورد مطالعه، مطابق انتظار از خانواده MYB بوده که در مسیر ساخت آنتوسیانین دخالت دارد.

فاکتور رونویسی LEC2 یکی از فاکتورهای رونویسی است که با اتصال به توالی پیشبرهای بذری سبب بیان ژن های پایین دستی می شود. استفاده از این فاکتور رونویسی در کنار روش آگرواینفیلتریشن می تواند زمان ارزیابی پیشبرهای بذری را با توجه به حذف زمان طولانی مدت انتقال دائم تا بذردهی کاهش دهد. در این تحقیق اختصاصی بودن بیان بذری ژن تحت کنترل پیشبر FAD2-1 پس از جداسازی از گیاه گلرنگ با استفاده از آنالیز بیان ژن GUS در برگهای توتون مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج توالی یابی پیشبر FAD2-1 نشان داد که این قطعه جدا شده از بالادست ژن FAD2-1 حاوی عناصر اساسی برای بیان اختصاصی در بذر است. جهت ارزیابی سریع اختصاصی بودن بیان بذری در پیشبر ژن FAD2-1 دو کاست ژنی طراحی گردید: کاست ژنی اول pFAD2-GUS (ژن GUS و پیشبر ژن (FAD2-1 و کاست ژنی دوم pBI-LEC2 (ژن LEC2 و پیشبر 35S). کاست های ژنی به صورت جداگانه در وکتور pBI121 کلون شده و در نهایت به سویه EHA105 آگروباکتریوم منتقل شدند. به منظور بررسی سریع عملکرد این پیشبر، آگروباکتریوم های حاوی دو سازه بصورت جداگانه آماده و کشت شده و پس از تنظیم غلظت هر دو کشت بر روی OD600=0. 6 به نسبت مساوی با هم مخلوط و به برگهای توتون تزریق شد. با آبی شدن برگهای تزریق شده با سازه یک+سازه دو و عدم مشاهده رنگ در برگهای تزریق شده با سازه یک یا سازه دو اختصاصی بودن بیان بذری این پیشبر تایید شد. نتایج نشان داد که فاکتور رونویسی LEC2 با شناسایی توالی های خاص در بالادست ژنهای بذری سبب بیان ژنهای پایین دستی می شود. از اینرو این تحقیق پیشنهاد می کند که فاکتور رونویسی LEC2 به همراه روش آگروینفیلتریشن می تواند به عنوان ابزاری کارا و سریع در تایید قطعاتی که بالقوه به عنوان پیشبر بذری جداسازی می شوند، استفاده شود.

هدف: بررسی اثر لیپوکالین 2 بر بیان آنزیم هم اکسیژنازI  وII  و فاکتور رونویسیNF-κB .مواد و روش ها: در این مطالعه ابتدا با استفاده از پلاسمید  PcDNA3-1و از طریق مهندسی ژنتیک، رده های سلولی پایدار مولد لیپوکالین 2 ایجاد شد (HEK293-V-Lcn2 و CHO-V-Lcn2). سلول های  CHOو HEK293 فاقد ژن لیپوکالین 2 هستند بنابراین پس از انجام ترانسفکشن با بررسی بیان ژن لیپوکالین 2 ورود ژن به درون این سلول ها تایید شد.آن گاه پس از استخراج RNA از سلول های حاوی ژن لیپوکالین نوترکیب از نمونه های RNA استخراج شده،cDNA  ساخته شده و بیان هم اکسیژناز I، II و(Nuclear factor kappa B) NF-kB  توسط روش های وسترن بلات و RT-PCR  بررسی شد.در مرحله بعد بیان لیپوکالین 2 توسط SiRNA در رده سلولی A549 کاهش یافت و تاثیر خاموش سازی ژن لیپوکالین 2 بر بیان آنزیم هم اکسیژناز I،II  و NF-κB با روش RT-PCR مطالعه شد.یافته ها: نتایج حاصل از آزمونPCR  و وسترن بلات بیانگر افزایش بیان آنزیم هم اکسیژناز I و فاکتور NF-κB در سلول های حاوی وکتور بیان کننده لیپوکالین 2 در مقایسه با سلول های کنترل است. همچنین خاموش سازی ژن لیپوکالین 2 توسط SiRNA منجر به کاهش بیان هم اکسیژناز  Iو NF-kB در رده سلولیA549  شد.نتیجه گیری: مشاهدات فوق نشان داد که لیپوکالین 2 باعث افزایش بیان آنزیم هم اکسیژنازI  می شود و با توجه به نتایج به دست آمده در این مطالعه، احتمال می رود که لیپوکالین 2 بتواند با فعال کردن هم اکسیژنازI  از طریق مسیر NF-kB، با استرس اکسیداتیو مقابله کرده و سبب تعدیل التهابات سلولی ناشی از (Reactive oxygen species) ROS شود.

مقاله پژوهشی مقدمه: هدف از مطالعه ی حاضر، بررسی ارتباط میزان بیان فاکتور مهم رونویسی POU5F1 در سلول های بنیادی اسپرماتوگونی با سن و ارائه ی الگوهای بیانی این فاکتور در لوله ی اسپرم ساز موش می باشد. روش ها: در مطالعه ی حاضر پس از استخراج بیضه ی موش های نوزاد دو هفته ای و بالغ 16 هفته ای که از مؤسسه ی پاستور ایران خریداری شد، سلول های بنیادی اسپرماتوگونی جدا سازی گردید؛ پس از کشت سلول ها در محیط کشت StemPro-34 medium حاوی فاکتورهای رشد اختصاصی کشت داده شدند. همینطور بافت برش داده شده پس از انجام مراحل فیکس کردن و آماده سازی، با آنتی بادی های اولیه و ثانویه انکوبه شدند و بررسی ایمنوهیستوشیمیایی با میکروسکوپ کونفوکال انجام گردید. همچنین آنالیز real-time PCR برای بررسی کمی میزان بیان فاکتور رونویسی POU5F1 استفاده شد. یافته ها: در حالی که در آنالیز ایمنوهیستوشیمیایی، بیان بالای فاکتور رونویسی  POU5F1در بیضه ی نوزاد مشاهده شد، تعداد سلول های POU5F1 مثبت در لوله های اسپرم ساز بیضه ی بالغ بیشتر از نوزاد بود. همینطور تجزیه و تحلیل real-time PCR نشان داد که میزان بیان ژن POU5F1 در SSC های نوزاد به طور معنی داری (0/05 P <) بالاتر از SSCهای 16 هفته ای بود. نتیجه گیری: نتایج حاصل می تواند پایه ابعاد جدیدی در ارتباط فاکتورهای اپی ژنتیکی با قدرت تمایزی سلول های بنیادی را آشکار سازد که باید در پژوهش های تمایز آزمایشگاهی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی به سلول های اسپرم مورد توجه قرار گیرد.

1آفتابگردان دانه ­ روغنی (Helianthus annuus L.) به ­طور گسترده در سراسر جهان کشت می­شود. شوری خاک بر بسیاری از صفات مورفولوژیک و فیزیولوژیک آفتابگردان تاثیر منفی می­گذارد. ژن های MYB  بخشی از یک خانواده ژنی بزرگ از فاکتورهای رونویسی هستند که پروتئین های هسته ای را رمزگذاری می­کنند و در مقاومت به شوری دخالت دارند. آفتابگردان روغنیِ متحمل به تنشِ شوری (AS5305)، در محیط کنترل شده در قالب طرح کاملاً تصادفی با دو تکرار زیستی در شرایط نرمال و تنش شوری کشت شد. تنش شوری  هشت دسی زیمنس بر متر در مرحله هشت برگی از منبع NaCl اعمال گردید. حدود 24 ساعت پس از اعمال تنش شوری نمونه­ برداری از برگ­ها انجام گرفت. ژن MYB44، به ­عنوان یکی از ژن­های دخیل در مقاومت به تنش شوری، در ناقل­های بیانی p35s-N و p35s-G همسانه­ سازی شده و تجزیه بیوانفورماتیکی بر روی آن انجام گرفت. تجزیه و تحلیل توالی MYB44 کلون شده به ترتیب بیش از 95% و 98% شباهت DNA  و پروتئین را بین ژن کلون شده با توالی MYB44 در NCBI نشان داد که نشان دهنده حفظ شدگی توالی بالای این ژن در بین ژنوتیپ های مختلف آفتابگردان است. به طور کلی، نتایج مطالعه حاضر بالقوه راه را برای به ­نژادی مولکولی آفتابگردان برای مقاومت به شوری هموار می­نماید.

لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (pdf) مراجعه فرمایید.